Off-label use of rhBMP-2 as bone regeneration strategies in mandibular ameloblastoma unicystic / Utilização off-label das rhBMP-2 como estratégia de regeneração do tecido ósseo em ameloblastoma mandibular

ABSTRACT Jawbone reconstruction after tumor resection is one of the most challenging clinical tasks for maxillofacial surgeons. Osteogenic, osteoinductive, osteoconductive and non-antigenic properties of autogenous bone place this bone as the gold standard for solving problems of bone availability. However, the need for a second surgical site to harvest the bone graft increases significantly both the cost and the morbidity associated with the reconstructive procedures. Bone grafting gained an important tool with the discovery of bone morphogenetic proteins in 1960. Benefit of obtaining functional and real bone matrix without need of second surgical site seems to be the great advantage of use bone morphogenetic proteins. This study analyzed the use of rhBMP-2 in unicystic ameloblastoma of the mandible, detailing its structure, mechanisms of cell signaling and biological efficacy, in addition to present possible advantages and disadvantages of clinical use of rhBMP-2 as bone regeneration strategy.

RESUMO A reconstrução óssea dos maxilares após ressecções tumorais é uma das tarefas mais difíceis para o cirurgião maxilofacial. As propriedades osteogênicas, osteoindutoras, osteocondutoras e não antigênicas do osso autógeno o colocam como o padrão-ouro para a solução de problemas de disponibilidade óssea. Entretanto a coleta do enxerto ósseo necessita de um segundo sítio cirúrgico, aumentando significativamente o custo e a morbidade associados ao procedimento reconstrutivo. A enxertia óssea ganhou uma excelente ferramenta com a descoberta das proteínas ósseas morfogenéticas na década de 1960. O benefício da obtenção de matriz óssea verdadeira e funcional, sem a necessidade de um segundo sítio cirúrgico, parece ser a grande vantagem do uso das proteínas ósseas morfogenéticas. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi analisar a utilização da rhBMP-2 na regeneração óssea de ameloblastoma mandibular unicístico, detalhando sua estrutura, seus mecanismos de sinalização celular e sua eficácia biológica, além de apresentar potenciais vantagens e desvantagens da utilização clínica das rhBMP-2, enquanto estratégia regenerativa.

Aplicabilidade de rhBMP-2 em diferentes técnicas de enxertia / rhBMP-2 applicability in different grafting techniques

Objetivo: analisar a influência da rhBMP-2 em enxer os bucofaciais, apresentando pesquisas recentes, feitas em animais e em humanos, bem como as diferentes metodologias de aplicabilidade clínica e os resultados obtidos por seus autores. Revisão de literatura: para que seja possível a instalação de implantes ou a correção de defeitos ósseos há necessidade de que exista ecido ósseo de boa qualidade. Sem isso, as possibilidades de sucesso nos procedimentos de osteointegração e reabilitações bucofaciais, visando devolver ao paciente o volume ósseo perdido, são muito reduzidas. As proteínas morfogenéticas ósseas (BMPs) são substâncias osteoindutoras e têm sido utilizadas na regeneração óssea. A procura por materiais que apresentem características semelhantes às alcançadas com o enxerto autógeno, com o objetivo de reduzir a morbidade dos procedimentos de restauração das estruturas ósseas perdidas, fez com que as pesquisas avancem para o lado dos materiais sintéticos, como é o caso da rhBMP-2, principal proteína morfogenética indutora de tecido ósseo. Considerações finais: novos estudos são necessários para analisar a viabilidade e o sucesso da aplicação dessas proteínas. Para tanto, pode-se observar que essas proteínas têm uma excelente função na formação óssea.

Avaliação imuno-histoquímica da BMP-2, BMP-4 e seus receptores BMPRIA e BMPRII em ameloblastomas e tumor odontogênico adenomatóide / Immunohistochemical evaluation of BMP-2, BMP-4 and its BMPRIA and BMPRII receptors in ameloblastomas and adenomatoid odontogenic tumor

As BMPs são componentes da superfamília de ligantes do fator transformador de crescimentoß (TGF-ß), secretados no meio extracelular, com mecanismos de comunicação intercelular por meio de ligantes e receptores específicos em diversas células-alvo, sendo reconhecidas por sua influência na indução osteogênica, também desempenhando importante papel na homeostase tecidual, proliferação celular, no controle de diferenciação, além de estar presente no desenvolvimento de diversas neoplasias. O objetivo deste estudo foi comparar a expressão imuno-histoquímica da BMP-2, BMP-4 e seus receptores BMPRIA e BMPRII em casos de Ameloblastoma e Tumor odontogênico adenomatóide. A amostra foi constituída de 20 casos de Ameloblastoma sólido (AS), 10 casos de Ameloblastoma unicístico (AU) e 16 casos de Tumor odontogênico adenomatóide (TOA). A expressão das BMPs e seus receptores foi avaliada no parênquima e estroma das lesões, estabelecendo-se o percentual de células imunopositivas (0 ­ negativo; 1 - 1% a 10% das células positivas; 2 - 11% a 25% das células positivas; 3 - 26% a 50% das células positivas; 4 - 51% a 75% das células positivas; 5 - mais 75% de células positivas). A análise da expressão de BMP-2 não revelou diferenças estatisticamente significativas no componente parênquimatoso (p = 0,925) e estromal (p = 0,345) entre as lesões estudadas, assim como a BMP-4 (p = 0,873 / p = 0,131). No parênquima, o AS e TOA apresentaram maior frequência do escore 5. Por sua vez, todos os casos de AU foram classificados como escore 5. A análise do componente estromal revelou não haver diferença estatisticamente significativa entre os grupos em relação às medianas dos escores de positividade para BMPRIA (p = 0,768) e BMPRII (p = 0,779). No parênquima do AS e do AU, não foram observadas correlações estatisticamente significativas entre as imunoexpressões das proteínas analisadas. Por sua vez, no grupo dos TOAs, foram constatadas correlações positivas, estatisticamente significativas, entre os escores de expressão de todas as proteínas avaliadas. No componente estromal, foram constatadas correlações positivas, estatisticamente significativas, apenas no grupo do AS em BMP-4 e BMPRII (r = 0,476; p = 0,034) e do AU em BMP-4 e BMPRIA (r = 0,709; p = 0,022). Os resultados do presente estudo sugerem que as BMPs e seus receptores estão envolvidos no processo de desenvolvimento de tumores odontogênicos. A BMP-4, por sua vez, além de estar presente em tumores odontogênicos possui a capacidade de formação de material mineralizado. (AU)

BMPs are components superfamily ligands transformation growth fator-ß (TGF-ß) secreted into the extracellular environment, with mechanisms of intercellular communication through specific ligands and receptors in various target cells, being recognized for its influence in osteogenic induction, also play an important role in tissue homeostasis, cell proliferation, differentiation control , in addition to being present in the development of various malignancies. The aim of this study was to compare the immunohistochemical expression of BMP-2, BMP-4 and its receptors BMPRIA and BMPRII in cases of ameloblastoma and adenomatoid odontogenic tumor. The sample consisted of 20 cases of solid ameloblastoma (SA), 10 cases of ameloblastoma unicystic (UA) and 16 cases of adenomatoid odontogenic tumor (AOT). The expression of BMPs and their receptors was evaluated in the parenchyma and stroma of lesions, establishing the percentage of immunopositive cells (0 - negative; 1-1 % to 10 % of cells positive; 2 - 11% to 25% of positive cells; 3 - 26% to 50% of cells positive; 4 - 51% to 75 % of positive cells; 5 - more than 75% positive cells). Analysis of the expression of BMP-2 revealed no statistically significant differences in parenchymal (p = 0.925) and stromal component (p = 0.345) between the groups, as well as BMP-4 (p = 0.873 / p = 0.131). In the epithelial component, SA and AOT had a higher frequency of score 5. In turn, all cases of UA were classified as score 5. The analysis of the stromal component showed no statistically significant difference between groups with respect to median scores BMPRIA positivity (p = 0.768) and BMPRII (p = 0.779). In the epithelial component of SA and UA, no statistically significant correlations between imunoexpression proteins analyzed were observed. In turn, the group of AOT, statistically significant positive correlations between the scores of expression of all studied proteins were found. In the stromal component, statistically significant positive correlations were found only in the SA group in BMP -4 and BMPRII (r = 0.476; p = .034), in the UA in BMP-4 and BMPRIA (r = 0.709; p = 0.022). The results of this study suggest that the BMPs and their receptors are involved in the development process odontogenic tumors. BMP-4, in turn, besides being present in odontogenic tumors have the capacity to form mineralized material. (AU)

Utilização da rhBMP-2 para aumento ósseo na região anterior de maxila: relato de caso clínico com reabilitação protética provisória / Alveolar bone augmentation in the anterior maxilla using rhbmp-2: a case report with provisional prosthetic rehabilitation

O objetivo deste artigo foi apresentar um caso clínico com implantes instalados na região anterior da maxila submetida ao procedimento de aumento ósseo horizontal com rhBMP-2. Uma paciente do sexo feminino, 52 anos, com severa perda óssea na região anterior da maxila constatada por tomografia computadorizada, recebeu rhBMP-2 associado a esponjas de colágeno bovino tipo 1 e malha de titânio fixada por parafusos específicos. Após seis meses de cicatrização, foi possível verificar na tomografia uma imagem hiperdensa correspondente ao volume ósseo mineralizado neoformado, e dois implantes foram instalados nas regiões 12 e 22. Após novos seis meses, os implantes foram expostos e os procedimentos reabilitadores foram iniciados. Os seguintes parâmetros foram avaliados: índice de placa visível e sangramento marginal, profundidade de sondagem e sangramento a sondagem, estabilidade pelo método de frequência de ressonância e perda óssea marginal. A rhBMP-2 demonstrou ser um substituto viável para o osso autógeno no procedimento de aumento ósseo horizontal de maxila atrófica, possibilitando reabilitação com implantes dentários. O tecido ósseo neoformado foi capaz de proporcionar a osseointegração dos implantes e suportar cargas mastigatórias pelo período de seis meses. Com base nos parâmetros avaliados, pôde-se concluir que os implantes instalados na região anterior da maxila submetida ao procedimento de aumento ósseo horizontal com rhBMP-2 apresentaram sucesso a curto prazo.

Uso da proteína morfogenética óssea recombinante humana-2 em levantamento de assoalho de seio maxilar / Recombinant human bone morphogenetic protein-2 in maxillary sinus floor augmentation

Pacientes desdentados posteriores frequentemente apresentam pneumatização dos seios maxilares, dificultando a colocação de implantes dentários. Atualmente, o material mais utilizado para o preenchimento de seio maxilar é o enxerto ósseo autógeno retirado de sítios intra ou extrabucais. Apesar desse procedimento ter sua eficácia comprovada clínica e histologicamente, nem sempre é bem tolerado pelos pacientes devido à morbidade associada à manipulação da área doadora. Por isso, vários substitutos ósseos vêm sendo desenvolvidos. A proteína óssea morfogenética recombinante humana-2 surgiu recentemente como uma alternativa aos enxertos autógenos, oferecendo excelente padrão de reparo e/ou neoformação óssea, quando utilizada na reconstrução de rebordos alveolares, possibilitando a reabilitação com próteses implantossuportadas. Nesse trabalho foi feita uma revisão da literatura e apresentação de caso de levantamento de assoalho de seio maxilar bilateral com o uso da proteína óssea morfogenética.

Edentulous patients in the posterior maxillary region frequently present pneumatization of maxillary sinuses, which makes difficult installation of dental implants. Nowadays, most commonly used materials for maxillary sinus filling are autogenous bone grafts from intra- or extra-oral donor sites. Despite the elevated clinical and histologic success rates of this procedure, it is always not well-tolerated by patients due to morbidity seen after donor site manipulation. For this, many bone substitutes have been developed. Recombinant human bone morphogenetic protein-2 appeared recently as an alternative to autogenous bone grafts, offering excellent patterns of bone repair and/or neoformation when used for reconstruction of alveolar ridges, allowing rehabilitation with implant-supported prostheses. The aim of this article is to perform a literature review and also to report a case in which bilateral elevation of maxillary sinus floor was performed along with rhBMP-2.

Efeito da desmineralização ácida da interface enxerto-leito na consolidação de enxertos ósseos autógenos em bloco / Influence of acid demineralization of contacting osseous surfaces on the consolidation of autogenous onlay bone grafts

Para testar a hipótese de que a desmineralização in situ das superfícies de contato enxerto-leito, e a forma como o enxerto é estabilizado ao leito, podem influenciar os mecanismos envolvidos na consolidação do enxerto, fragmentos ósseos de 10 mm de diâmetro foram removidos das metáfises proximais tibiais de 36 coelhos (Oryctolagus Cuniculus) e transplantados para uma área adjacente. Na tíbia esquerda dos animais, as superfícies de contato do enxerto e do leito hospedeiro foram desmineralizadas com ácido cítrico pH 1,0 por 3 minutos antes dos enxertos serem fixados ao leito. Na tíbia direita, o transplante do bloco ósseo não foi precedido de desmineralização. Metade dos enxertos foi imobilizada sobre o leito pela superposição de uma membrana não reabsorvível de politetrafluoretileno colada com cianoacrilato ao leito à distância da interface enxerto-leito. A outra metade dos enxertos foi fixada por um parafuso de titânio no centro do enxerto. Assim, foram formados 4 grupos de estudo: membrana (M), membrana + ácido (MA), parafuso (P) e parafuso + ácido (PA). Três animais de cada grupo forneceram espécimes para análise microscópica quantitativa e qualitativa aos 15, 30 e 45 dias de pós-operatório. A análise qualitativa demonstrou que não houve formação óssea na interface em nenhum espécime aos 15 dias e que nos demais períodos, em todos os grupos, a quantidade de tecido ósseo neoformado na interface e seu estágio de maturação aumentaram com o tempo. Ambos os métodos de fixação empregados foram eficientes em manter os enxertos em posição, porém a membrana promoveu menor reabsorção da estrutura do enxerto. A análise quantitativa computadorizada revelou que, aos 30 dias, os grupos MA e PA apresentaram maior área de formação óssea na interface (71,34 ± 12,03%; 56,74 ± 2,15% respectivamente) em relação aos grupos M e P (51,75 ± 11,02%; 43,95 ± 4,05% respectivamente) e superfícies de consolidação óssea mais extensas (93,41 ± 5,95%; 93,73 ± 4,96%...

In order to test the hypothesis that the demineralization "in situ" of contacting surfaces of bone graft/bone bed and the fixation method used for graft stabilization can influence the mechanisms involved in the consolidation of the graft, bone fragments of 10 mm in diameter were removed from the proximal tibial metaphysis of thirty-six male rabbits (Oryctolagus Cuniculus) and transplanted to an adjacent area. In the left tibia of the animals, the contacting surfaces of the graft and host bed were demineralized with citric acid pH 1.0 for 3 minutes before the grafts were fixed to the receptor bed. In the right tibia, the bone block transplantation was not preceded by demineralization. Half of the grafts were immobilized on the bone bed by a nonresorbable polytetrafluoroethylene membrane glued with cyanoacrylate adhesive to the host bed distant from the bone graft-bone bed interface. The other half of the grafts were fixed by a titanium screw in the center of the graft. Thus, four groups were formed: membrane (M), membrane + acid (MA), screw (P) and screw + acid (PA). Three animals from each group provided specimens for quantitative and qualitative microscopic analysis at 15, 30 and 45 days postoperatively. Qualitative analysis showed no significant bone formation at the interface in any specimen of the groups at 15 days and on the other periods in all groups, the amount of newly formed bone at the interface as well as the stage of bone maturation increased with time. Both fixation methods were effective in maintaining the graft in position, but the membrane resulted in less resorption of the graft. Quantitative analysis, performed by means of a computer program for image analysis, showed that at day 30, groups MA and PA, showed greater area of bone formation at the interface (71.34 ± 12.03%; 56.74 ± 2 15%) than groups M and P (51.75 ± 11.02%, 43.95 ± 4.05%) and more osseointegrated bone surfaces (93.41 ± 5.95%, 93.73 ± 4.96%) than those...

Efeito da desmineralização ácida da interface enxerto-leito na consolidação de enxertos ósseos autógenos em bloco / Influence of acid demineralization of contacting osseous surfaces on the consolidation of autogenous onlay bone grafts

Para testar a hipótese de que a desmineralização in situ das superfícies de contato enxerto-leito, e a forma como o enxerto é estabilizado ao leito, podem influenciar os mecanismos envolvidos na consolidação do enxerto, fragmentos ósseos de 10 mm de diâmetro foram removidos das metáfises proximais tibiais de 36 coelhos (Oryctolagus Cuniculus) e transplantados para uma área adjacente. Na tíbia esquerda dos animais, as superfícies de contato do enxerto e do leito hospedeiro foram desmineralizadas com ácido cítrico pH 1,0 por 3 minutos antes dos enxertos serem fixados ao leito. Na tíbia direita, o transplante do bloco ósseo não foi precedido de desmineralização. Metade dos enxertos foi imobilizada sobre o leito pela superposição de uma membrana não reabsorvível de politetrafluoretileno colada com cianoacrilato ao leito à distância da interface enxerto-leito. A outra metade dos enxertos foi fixada por um parafuso de titânio no centro do enxerto. Assim, foram formados 4 grupos de estudo: membrana (M), membrana + ácido (MA), parafuso (P) e parafuso + ácido (PA). Três animais de cada grupo forneceram espécimes para análise microscópica quantitativa e qualitativa aos 15, 30 e 45 dias de pós-operatório. A análise qualitativa demonstrou que não houve formação óssea na interface em nenhum espécime aos 15 dias e que nos demais períodos, em todos os grupos, a quantidade de tecido ósseo neoformado na interface e seu estágio de maturação aumentaram com o tempo. Ambos os métodos de fixação empregados foram eficientes em manter os enxertos em posição, porém a membrana promoveu menor reabsorção da estrutura do enxerto. A análise quantitativa computadorizada revelou que, aos 30 dias, os grupos MA e PA apresentaram maior área de formação óssea na interface (71,34 ± 12,03%; 56,74 ± 2,15% respectivamente) em relação aos grupos M e P (51,75 ± 11,02%; 43,95 ± 4,05% respectivamente) e superfícies de consolidação óssea mais extensas (93,41 ± 5,95%; 93,73 ± 4,96%...

In order to test the hypothesis that the demineralization "in situ" of contacting surfaces of bone graft/bone bed and the fixation method used for graft stabilization can influence the mechanisms involved in the consolidation of the graft, bone fragments of 10 mm in diameter were removed from the proximal tibial metaphysis of thirty-six male rabbits (Oryctolagus Cuniculus) and transplanted to an adjacent area. In the left tibia of the animals, the contacting surfaces of the graft and host bed were demineralized with citric acid pH 1.0 for 3 minutes before the grafts were fixed to the receptor bed. In the right tibia, the bone block transplantation was not preceded by demineralization. Half of the grafts were immobilized on the bone bed by a nonresorbable polytetrafluoroethylene membrane glued with cyanoacrylate adhesive to the host bed distant from the bone graft-bone bed interface. The other half of the grafts were fixed by a titanium screw in the center of the graft. Thus, four groups were formed: membrane (M), membrane + acid (MA), screw (P) and screw + acid (PA). Three animals from each group provided specimens for quantitative and qualitative microscopic analysis at 15, 30 and 45 days postoperatively. Qualitative analysis showed no significant bone formation at the interface in any specimen of the groups at 15 days and on the other periods in all groups, the amount of newly formed bone at the interface as well as the stage of bone maturation increased with time. Both fixation methods were effective in maintaining the graft in position, but the membrane resulted in less resorption of the graft. Quantitative analysis, performed by means of a computer program for image analysis, showed that at day 30, groups MA and PA, showed greater area of bone formation at the interface (71.34 ± 12.03%; 56.74 ± 2 15%) than groups M and P (51.75 ± 11.02%, 43.95 ± 4.05%) and more osseointegrated bone surfaces (93.41 ± 5.95%, 93.73 ± 4.96%) than those...

Fosfoproteômica e proteômica quantitativa de células mesenquimais durante a diferenciação osteoblástica mediada por BMP2, expressão e purificação de diferentes tipos de proteínas morfogenéticas ósseas / Quantitative phosphoproteomics and proteomics of mesenchymal stem cells during BMP2-mediated osteoblastic differentiation, expression and purification of different types of bone morphogenetic proteins

As fraturas e perdas ósseas representam altos riscos para o Sistema público de Saúde (SUS), além de afetar a qualidade de vida do paciente, portanto é necessário o entendimento das bases moleculares que envolvem os mecanismos de reparo ósseo. Citocinas secretadas por células do sistema imune presentes no local da inflamação, como as IL-6, IL-10 e TNFα atuam como fatores quimiotáticos para células mesenquimais, que proliferam e se diferenciam em osteoblastos pela ação autócrina e parácrina de Proteínas Morfogenéticas Ósseas (BMPs), principalmente a BMP2. Embora seja conhecido que a ação de BMP2 ocorra através de sua ligação nos receptores ActRI/BMPR, que ativam proteínas SMADS 1/5/8 efetoras, pouco se sabe sobre os mecanismos intracelulares que participam do processo de diferenciação osteoblástico. Neste estudo propôs-se analisar as diferenças no conteúdo de proteínas totais e de proteínas fosforiladas em células mesenquimais de pele induzidas à osteogênese pelo tratamento com BMP2 por diferentes períodos de tempo, utilizando-se de Isótopos Estáveis de Dimetila acoplado ao LC/MS. A partir de 150µg de material inicial, foi possível identificar 2.264 proteínas, as quais foram quantificadas nos diferentes pontos de indução, sendo que 235 são fosforiladas. Análise de motivos de quinases mostrou que diversos substratos possuem sítios fosforilados correspondentes àqueles dos motivos de fosforilação das quinases Casein Kinase, p38, CDK e JNK. A análise da ontologia gênica mostrou um aumento de processos biológicos relacionados com sinalização e diferenciação após a primeira hora de indução com rhBMP2. Além disso, proteínas envolvidas com o rearranjo do citoesqueleto e com vias de sinalização Wnt e Ras foram encontradas como tendo fosforilação diferencial durante todos os períodos estudados. Os dados revelaram novos substratos intracelulares que são fosforilados nos primeiros momentos do comprometimento com a diferenciação osteoblástica mediada pelo tratamento com rhBMP2 em células mesenquimais derivadas da pele. Além disso, clones celulares que superexpressam as proteínas recombinantes humanas BMP2 e BMP4 foram gerados, e sua atividade verificada in vitro. Paralelamente, a rhBMP7, obtida anteriormente, foi purificada por cromatografia de afinidade utilizando-se uma coluna de Heparina-Sepharose, que foi posteriormente utilizada para ensaios in vitro e in vivo, nos quais se mostrou capaz de gerar osteoblastos e tecido ósseo, respectivamente, o que abre novas possibilidades para o uso destas proteínas como biofármacos no Brasil

Bone fractures and loss represent significant costs for the public health system and often affect the patients quality of life, therefore, understanding the molecular basis for bone regeneration is essential. Cytokines, such as IL-6, IL-10 and TNFα, secreted by inflammatory cells at the lesion site, at the very beginning of the repair process, act as chemotactic factors for mesenchymal stem cells, which proliferate and differentiate into osteoblasts through the autocrine and paracrine action of bone morphogenetic proteins (BMPs), mainly BMP-2. Although it is known that BMP-2 binds to ActRI/BMPR and activates the SMAD 1/5/8 downstream effectors, little is known about the intracellular mechanisms participating in osteoblastic differentiation. We assessed differences in the phosphorylation status of different cellular proteins upon BMP-2 osteogenic induction of isolated human skin mesenchymal stem cells using Triplex Stable Isotope Dimethyl Labeling coupled with LC/MS. From 150 µg of starting material, 2,264 proteins containing two or more peptides were identified and quantified at five different time points, 235 of which are differentially phosphorylated. Kinase motif analysis showed that several substrates display phosphorylation sites for Casein Kinase, p38, CDK and JNK. Gene ontology analysis showed an increase in biological processes related with signaling and differentiation at early time points after BMP2 induction. Moreover, proteins involved in cytoskeleton rearrangement, Wnt and Ras pathways were found to be differentially phosphorylated during all timepoints studied. Taken together, these data, allow new insights on the intracellular substrates which are phosphorylated early on during commitment to BMP2-driven osteoblastic differentiation of skin-derived mesenchymal stem cells. Cell clones overexpressing the human BMP 2 and 4 recombinant proteins were also generated, and their biological activity was confirmed in vitro. In parallel, chromatography-affinity purified rhBMP7, obtained using heparin-Sepharose columns, was used for in vivo and in vitro assays to evaluate the ability of this purified protein to generate osteoblasts and bone tissue, respectively, opening new avenues for the use of these proteins as biopharmaceuticals in Brazil

BMPs em Implantodontia: uma revisão dos estudos clínicos / BMPs in implant dentistry: a review of clinical studies

As proteínas morfogenéticas ósseas (BMPs) estão presentes no organismo humano e desempenham as mais diferentes funções. Uma, em especial, desperta o interesse da Implantodontia: a regeneração óssea. Por muitos anos, o poder osteoindutor das BMPs vem sendo estudado nas diferentes áreas da saúde e diversos estudos in vitro e experimentais já comprovaram que as BMPs são capazes de induzir crescimento ósseo. Baseado nisso, e mais recentemente em estudos clínicos, é que a Food and Drug Administration (FDA) aprovou o uso da rhBMP-2 associada a uma esponja de colágeno reabsorvível como alternativa de substituto ósseo em enxertias. Sendo assim, objetiva-se realizar uma revisão da literatura dos estudos clínicos realizados com as BMPs na área de interesse da Implantodontia, pois observando-se os diferentes trabalhos sobre o uso das BMPs em alvéolos pós-extrações, o aumento do rebordo edêntulo e o levantamento do assoalho do seio maxilar foi possível concluir que ainda é necessário um número maior de estudos qualificados e de longo prazo; embora, as evidências científicas existentes demonstrem resultados tão eficazes com o uso das BMPs associadas a carreadores quanto os alcançados com o osso autógeno nessas indicações.

Bone morphogenetic proteins (BMPs) are present in our organism and perform a variety of functions. One of these functions, particularly for Implant Dentistry, is bone regeneration. For many years, the BMPs osteoinductive power has been studied in the different health sciences. Many experimental and in vitro studies have already confirmed that BMPs have the capacity to induce bone growth. Based on this, and more recently on clinical studies, the Food and Drug Administration (FDA) approved the use of rhBMP-2 in association with an absorbable collagen sponge as an alternative of bone substitute in case of bone grafting. Therefore, the aim of this study was to review the literature on clinical studies using BMPs in Implant Dentistry. Observing the different studies about the use of BMPs in post-extraction pockets, edentulous ridge augmentation and maxillary sinus lifting, it was possible to conclude that it’s still necessary a greater number of qualified and long-term studies to certify some aspects. However, the existing scientific evidences show that the use of BMPs associated with carriers or autogenous bone in these indications presented the same effective results.

PRP ou BMPs: qual a melhor opção para enxertia e aceleração de osseointegração nas reabilitações com implantes? Revisão de literatura / PRP or BMPs: what is the best option for grafting and acceleration of osseointegration in rehabilitation with implants? Literature review

Nos últimos anos, a reabilitação oral através da instalação de implantes osseointegrados vem sendo cada vez mais difundida e realizada. O sucesso do tratamento está diretamente associado à qualidade e quantidade do tecido ósseo presentes, favorecendo ou não o procedimento. Na ausência de condições favoráveis o cirurgião pode lançar mão de técnicas que visam promover o aumento de volume e qualidade óssea do espaço protético, através de enxertos, para a posterior instalação dos implantes resultando, porém, em um prolongamento do período de tratamento. Mesmo diante de condições ideais, a reabilitação protética depende fundamentalmente do processo de neoformação óssea ao redor de implante, que leva de 4 a 6 meses para ocorrer de forma satisfatória, de modo a suportar a carga mastigatória sem risco de mobilização e eventual perda dos implantes. Com o intuito de acelerar o processo de osseointegração, ou de maturação óssea de enxertos, fatores de crescimento capazes de induzir e acelerar a neoformação óssea presentes no plasma rico em plaquetas (PRP) e nas proteínas morfogenéticas ósseas (BMPs) vêm sendo amplamente utilizados. O objetivo deste trabalho é comparar a efetividade do PRP e das BMPs através da revisão de literatura.

In recent years, the oral rehabilitation through the installation of dental implants is becoming more widespread and carried out. Treatment success is directly associated with quality and quantity of bone tissue present, or may favor or not the procedure. In the absence of favorable conditions for the surgeon may resort to techniques that promote increased bone volume and quality of the abutment, by grafting, for the subsequent installation of implants resulting, however, a longer treatment period. Even with ideal conditions, the prosthetic rehabilitation depends mainly on the process of bone formation around the implant, which takes 4-6 months to occur satisfactorily, to withstand the masticatory load without risk of mobilization and eventual loss of the implants. Aiming to accelerate the process of osseointegration or bone graft maturation, growth factors capable of inducing and accelerating bone formation present on the plateletrich plasma (PRP) and bone morphogenetic proteins (BMPs) have been widely used. The aim of this study is to compare the effectiveness of the RPP and BMPs through a literature review.

Uso clínico de fatores de crescimento nas regenerações periodontal e óssea / Clinical use of growth factors in bone and periodontal regeneration

A periodontite é uma patologia multifatorial, que apresenta alta prevalência. Caracteriza-se pela destruição dos tecidos periodontais de suporte, por ocasionar a reabsorção óssea e culminar com a perda dentária. Modificadores da resposta cicatricial, tais como os fatores de crescimento, têm sido aplicados no tratamento das sequelas da doença, na tentativa de se obter a regeneração dos tecidos periodontais e peri-implantares perdidos. Pesquisas recentes, em animais e humanos, têm mostrado resultados promissores com o uso do fator de crescimento derivado de plaquetas e da proteína morfogenética óssea para o tratamento de defeitos ósseos, lesões de bifurcações e para auxiliar reabilitações com implantes dentários. Estes resultados permitiram o desenvolvimento e lançamento de dois produtos comerciais. Esta revisão da literatura tem o objetivo de comentar criticamente as possibilidades clínicas e os resultados do uso destes dois produtos

Periodontitis is a multifactorial disease, with high prevalence. It is characterized by destruction of periodontal tissues, leading to bone resorption and to tooth loss. Modifiers of the healing response such as growth factors, has been applied in the treatment of sequelae of the disease to achieve the regeneration of lost periodontal and peri-implant tissues. Recent research in animals and humans have shown promising results with the use of growth factor derived from platelets and bone morphogenetic protein for the treatment of bone defects, lesions in bifurcations and to assist rehabilitations with dental implants. These results enabled the development and launch of two commercial products. Therefore this review aims to critically comment on the scope and results of clinical use of these products.

Estudo clínico-patológico do carcinoma epidermóide de língua e imunohistoquímico das proteínas bmp-2, bmpr-ia, bmpr-ii e endoglina / Physician-pathological study of the carcinoma epidermóide of language and imunohistoquímico of proteins bmp-2, bmpr-went, bmpr-ii and endoglina

As BMPs (proteinas morfogenéticas ósseas) são citocinas relacionadas com a proliferação e angiogênese em diversos tipos de câncer humano. Com este trabalho foi analisada a expressão imunohistoquímica das proteínas NMP-2, BMPR-IA, BMPR-II e endoglina (CD105), correlacionando-a com o comportamento biológico e a angiogênese local nos carcinomas epidermóides de língua (CEL). A amostra foi composta de 25 casos de CEL sem metástase (CELSM), 25 CEL com metástase (CELCM) graduados segundo Bryne (1198) e adaptado por Miranda (2002), além de 25 casos de hiperplasia fibrosa inflamatória (HFI), utilizado como grupo controle. Foi utilizado escore 0 para marcação ausente-fraca e 1 para forte; tipo de distribuição focal ou difuso. Adicionalmente, para o CD105 foi realizada a contagem microvascular (MVC). A maior parte dos pacientes com CEL foi do sexo masculino, no grupo CELSM a faixa etária foi maior que 65 anos e o CELCM se encontrou entre 45-65 anos; houve predomínio do estágio II do TNM, assim como de...

Acompanhamento histomorfométrico e radiográfico do reparo de defeito crítico em crânio de ratos preenchidos com associação de osso medular bovino e BMP / Histomorphometric and radiographic monitoring the repair of critical defects in skulls of rats completed with combination of medular bovine bone plus BMP

O objetivo deste trabalho foi avaliar histomorfometricamente o processo de reparo de defeito ósseo perene na calvária de ratos preenchidos com grânulos de osso medular bovino desproteinizado, associado a um pool de proteínas morfogenéticas ósseas (BMPs) bovinas. Após 1, 3 e 6 meses, as calotas cranianas foram coletadas, processadas e as sessões obtidas coradas em Hematoxilina e Eosina. A análise histomorfométrica mostrou que o xenoenxerto não foi completamente degradado durante os períodos estudados, com a densidade de volume do material implantado permanecendo próximo de 50% em todos os períodos (p > 0,05). No grupo controle a densidade de volume do tecido conjuntivo era de 62,5% ± 8,81% (1° mês), diminuindo significantemente para 40,2% ± 7,5% após 6 meses (p < 0,05), enquanto que o volume de tecido ósseo neoformado passou de 37,5% ± 8,81% no 1° mês para 59,8% ± 7,5% aos 6 meses (p < 0.05). No grupo experimental, o volume de tecido conjuntivo diminuiu de 45,8% ± 7,8% (1° mês) para 31,8% ± 8,38% (6° mês), ao passo que o volume do tecido ósseo neoformado aumentou de 7,0% ± 2,45% (1° mês) para 19,6% ± 11,04% (6° mês) (p < 0,05). Conclui-se que, a despeito da biocompatibilidade e propriedade osteocondutora do xenoenxerto, o composto estudado retardou o reparo ósseo em defeito críticos no crânio de ratos.

The objective of this study was to evaluate the healing process of perennial bone defect in the skull of rats promoted by treating the defects with inorganic granules of bovine bone plus a pool of bone morphogenetic proteins (BMPs). After 1, 3 and 6 months from surgery, the whole skulls were carefully collected and sections obtained were stained with Hematoxylin & Eosin. We showed that implanted material was not completely resorbed during the periods studied, remaining around 50% in all periods (p > 0.05). In the control group the volume of connective tissue decreased significantly from 62.5% ± 8.81% (1 month) to 40.2% ± 7.5% after 6 months (p < 0.05), while that the amount of neoformed bone increased from 37.5% to ± 8.81% (1 month) to 59.8% ± 7.5% (6 months) (p < 0.05). On the other hand, in the experimental group, the volume of connective tissue decreased from 45.8% ± 7.8% (1 month) to 31.8% ± 8.38% (6 months), while the amount of neoformed bone tissue increased from 7.0% ± 2.45% (1 month) to 19.6% ± 11.04% (6 months) (p < 0.05). Based on results, we concluded that, despite the biocompatibility and osteoconductive property of signaling molecules such as BMPs, their combination with bovine bone particles delayed the new bone formation in critical defects rats.

Pulpotomy in human deciduous teeth and bone morphogenetic protein (rhBMP-2) / Pulpotomia em dentes decíduos humanos e proteína morfogenética do osso (rh BMP-2)

OBJECTIVES: Recent studies of pulpotomy and direct pulp capping using bone morphogeneticprotein (BMP) in the teeth of animals have indicated a role for BMP in the induction and biologicalproduction of dentin. The aim of this study was to observe painful reactions and signs of clinicaland radiographic pathological alterations in human deciduous teeth, as well as to histologicallyexamine pulp tissue after the use of recombinant human BMP-2 in a collagen scaffold. MATERIALAND METHOD: Five deciduous teeth for which pulpotomy had been indicated were studied.rhBMP-2 was placed in the pulp chamber of the teeth, and they were then filled using compositeresin. In two teeth that exfoliated, histological examinations were performed. RESULTS: Aftertwelve months, we observed 100% clinical and radiographic success, with no detectableabnormalities. On the histological sections, areas of inflammation, pulp necrosis and internalreabsorption, as well as the formation of tissue resembling osteodentin in the radicular portion,were observed. CONCLUSIONS: It could be concluded that the absence of symptomatologyand clinical and radiographic alterations suggests that rhBMP-2 is a material with inductive propertiesthat should be further investigated for use as an alternative to pulpotomy treatment.

OBJETIVOS: A proposta deste estudo foi observar as reações álgicas, sinais de alteraçõespatológicas (clínica e radiográfica) e examinar histologicamente o tecido pulpar de molaresdecíduos humanos, após o uso de BMP-2 recombinante humano em arcabouço de colágeno.MATERIAL E MÉTODO: Foram utilizados cinco molares decíduos de crianças entre oito edez anos, com indicação de pulpotomia. Após execução da técnica, na câmara foi acomodadaa rhBMP-2 em colágeno e o dente restaurado com resina composta. Estes pacientes foramacompanhados durante doze meses, dois dentes que esfoliaram foram realizados exameshistológicos (H.E.). RESULTADOS: Após este período observou-se sucesso clínico eradiográfico de 100%, pois nenhuma anormalidade foi detectada. Foram observadas noscortes histológicos, áreas de inflamação, necrose pulpar e reabsorção interna, também formaçãode tecido semelhante a osteodentina. CONCLUSÕES: Pode-se concluir que as ausências desintomas e de alterações clínicas e radiográficas sugerem que as rhBMP-2 em arcabouço decolágeno são materiais com propriedades indutivas que devem ser melhor pesquisadas paraque se tornem alternativa para as pulpotomias.

Uso da BMP-2 e 7 na promoção da osseointegração às superfícies dos implantes de titânio / The usage of BMP-2 and 7 for the promotion of the osseointegration to titanium implants surfaces

Para que seja possível a instalação dos implantes, há necessidade de que exista tecido ósseo de boa qualidade. Sem isto, as possibilidades de osseointegração e, portanto, de sucesso são muito reduzidas. As proteínas morfogenéticas ósseas (BMPs) são substâncias osteoindutoras e têm sido utilizadas na regeneração periodontal e na osseointegração. Em função disto, foi realizada uma revisão de literatura para analisar a influência da BMP-2 e 7 na osseointegração da superfície dos implantes com o osso neoformado. As BMP-2 e 7 promovem uma neoformação óssea, produzindo uma área propícia para a instalação dos implantes. Além disso, estas proteínas permitem uma melhor osseointegração com a superfície de titânio, acelerando-a e possibilitando uma adaptação precoce às cargas funcionais. A aplicação da BMP-2 ou 7 pode ter utilidade clínica, no caso os implantes, além de ser uma alternativa para os enxertos ósseos autógenos. Novos estudos são necessários para analisar a viabilidade e o sucesso da aplicação destas proteínas no caso de implantes intra-orais em humanos.

For the implants installation to be possible there is a need for a good quality osseous tissue to exist. Without this, the possibilities of osseointegration and, therefore, the success, are much reduced. The bone morphogenetic proteins (BMPs) are osseous inducers substances and have been used in the periodontal regeneration and in the osseointegration. In function of that, a literature revision was carried out to analyze the influence of BMP-2 and 7 in the osseointegrationof implants surface, with the neoformed bone. The BMP-2 and 7 promote a bone neoformation, thus producing an adequate area for the implants installation. Besides that, these proteins allow a better osseointegration with the titanium surface, expediting it and enabling a precocious adaptation to the functional loads. The application of BMP-2 or 7 can have clinical utility, in this case the implants, besides being an alternative for the autogenous osseous grafts. New studies are necessary to analyze the viability and the success of these proteins application, in case of intraoral implants in humans.

Avaliação histológica da dentina de dentes de ratos submetida à ação da BMP - proteína morfogenética associada à hidroxiapatita e colágeno* / Histological evaluation of Wistar rat`s dentin teeth through the acting of the BMP - morphogenetic protein associated to the hydroxyapatite and collagen

Introdução - O objetivo deste projeto de pesquisa foi avaliar histologicamente os efeitos da colocação da BMP associada à hidroxiapatita em dentina de dentes de ratos. Material e Método - Foram utilizados 20 dentes de ratos machos tipo Wistar com peso entre 300 e 350 gramas. O piloto foi constituído de quatro destes dentes para padronização da profundidade de preparo. O Grupo 1 -controle- quatro dentes foram extraídos para observação do aspecto histológico da dentina hígida. No Grupo 2, quatro dentes receberam preparo+BMP + hidroxiapatita + colágeno seguido de selamento com CIV resino-modificado (Vitrebond-3M) e após 48 horas, foram extraídos. No Grupo 3, quatro dentes receberam preparo e tratamento iguais aos realizados no Grupo 2 e após cinco dias foi realizada a extração. No Grupo 4, quatro dentes receberam o mesmo preparo e tratamento do Grupo 2 e foram extraídos após 20 dias. Após as extrações, os dentes dos Grupos 2, 3 e 4 foram analizados histologicamente. Resultados - O aspecto histológico observado nas lâminas mostra que há biocompatibilidade evidente entre o material e o tecido dentinário porque foi observado que não houve alteração degenerativa nos túbulos dentinários envolvidos no processo de preparo em contato com o material utilizado. Em alguns casos, foi possível observar aspectos semelhantes a calcificação distrófica sugestiva de um processo de proteção frente à agressão do material. Conclusões - Os resultados permitiram concluir que a BMP associada à hidroxiapatita é um material biocompatível, podendo ser utilizado em dentina. É necessária observação da ação do material por um período maior a fim de se certificar da indução de formação de dentina reparadora

Effect of bovine bone morphogenetic proteins on radius fracture healing in rabbits / Efeito de proteínas morfogenéticas ósseas de origem bovina na consolidação de fraturas induzidas no rádio de coelhos

PURPOSE: To investigate the effect of bovine bone morphogenetic proteins (bBMPs) bound to hydroxyapatite plus collagen in the healing of unstable radius fractures. METHODS: A transverse fracture was induced at the mid of the diaphysis in both radii on 15 Norfolk rabbits with average age of 5.5 months and 3.5kg. A mixture of bBMPs bound to thin powdered hydroxyapatite (bBMP-HA) and bovine collagen as agglutinant was applied to the right radius fracture site. The left radius fracture was considered control and no treatment was used. After 30, 60 and 90 days (5 rabbits/period) the rabbits were euthanized and the radii were collected for histological analysis. RESULTS: The descriptive histological analysis revealed that repair was similar for both forelimbs. The histomorphometric analysis showed that the mean area of newly formed bone was 867442.16 mm², 938743.00 mm² and 779621.06 mm² for the control forelimbs, and 841118.47 mm², 788038.76mm² and 618587.24 mm² for the treated forelimbs at 30, 60 and 90 days, respectively. Thus the newly formed bone area was 12.17 percent larger in the forelimbs treated with bBMP-HA/collagen than in the control forelimbs (p<0.05, Tukey test) in the 60-day period after surgery. In both forelimbs the newly formed bone area increased throughout the experimental period until the complete fracture healing. CONCLUSION: Based on the result obtained here we concluded that bBMP-HA/collagen induced a lower but significant improvement in fracture consolidation.

OBJETIVO: Investigar a influência de Proteínas Morfogenéticas Osseas de origem bovina (bBMPs) ligadas a hidroxiapatita mais colágeno na consolidação de fraturas instáveis do rádio. MÉTODOS: Em 15 coelhos com aproximadamente 5,5 meses de idade e peso médio de 3,5kg foi realizada uma fratura transversa na porção média da diáfise do rádio de ambos os membros. Na fratura do rádio direito foi aplicada mistura de bBMPs ligadas à hidroxiapatita (bBMP-HA) e colágeno bovino como aglutinante e na do rádio esquerdo, considerada controle, nenhum tratamento foi usado. Os coelhos (cinco por período) foram submetidos à eutanásia aos 30, 60 e 90 dias após a cirurgia para realização do processamento histológico e análise microscópica. RESULTADOS: A análise histológica descritiva revelou que a consolidação foi similar para os membros tratado e controle. Pela análise histomorfométrica, a área de novo osso foi em média 867442,16 mm², 938743.00 mm² e 779621,06 mm² para os membros controles e 841118,47 mm², 788038,76mm² e 618587,24 mm² para os membros tratados, aos 30, 60 e 90 dias, respectivamente. Desta forma, aos 60 dias de pós-operatório a área de novo osso foi 12.17 por cento maior no membro tratado com bBMP-HA/colágeno em relação ao membro controle (p<0.05, teste de Tukey). Em ambos os membros a área de novo osso aumentou durante o período experimental até a total consolidação da fratura. CONCLUSÃO: Baseado nos resultados obtidos foi possível concluir que a mistura de bBMP-HA/colágeno induziu pequena, porém significante melhora na consolidação da fratura.

Implante de proteína morfogenética ósses (rhBMP-2) em arcabouço de osso inorgânico no tecido muscular de rato: avaliação histológica e radiográfica / Bone Morphogenetic Protein´s (rhBMP-2) in bone inorganic scaffold implanted at rat's muscle tissue: histological and radiographic evaluation

No presente trabalho, foi realizada avaliação histológica e radiográfica do implante de proteína morfogenética óssea recombinante humana (rhBMP-2) em arcabouço de osso mineral desnaturado extraído de fêmur de vitelo, em tecido muscularde rato. Dezesseis animais foram anestesiados na porção mediana da tíbia e foi realizada incisão no músculo, no sentido longitudinal, no qual foi implantada rhBMP-2 em arcabouço de osso inorgânico. Decorridos 7, 21, 40 e 112 dias da cirurgia, os animais, em número de quatro para cada período, foram anestesiados, radiografados e removidas a peças contendo os implantes. Os cortes histológicos obtidos após processamento laboratorial foram corados com hematoxilina-eosina para estudo microscópio. Os resultados evidenciaram que, na fase inicial, há formação de processo inflamatório agudo evidenciado pelo exsudato de neutrófilos. Nos períodos finais do experimento, a rhBMP-2 em arcabouço de osso inorgânico estavam parcialmente reabsorvidos - o que pôde ser confirmado com os exames radiográficos -, era notado neovascularização e o tecido muscular circundante apresentava aspecto de normalidade, o que evidenciou a biocompatibilidade dos implantes. A capacidade indutora de diferenciação celular da rhBMP-2 foi inibida.

Células-tronco e engenharia tecidual: perspectivas de aplicação em odontologia / Stem cells and tissue engineering: application's perspectives in dentistry

As células-tronco, também conhecidas como células fonte ou stem cells, são definidas como células com baixo grau de diferenciação, que possuem a capacidade de se auto-reproduzirem, bem como gerar células diferenciadas de tipos especializados de tecidos. Inúmeros trabalhos relatam a utilização da terapia celular por meio de transplantes de células progenitoras em humanos no tratamento de doenças degenerativas, em alterações do desenvolvimento humano e na regeneração de tecidos. Em Odontologia, a expectativa é de novas alternativas na regeneração dentinopulpar, regeneração do tecido periodontal, regeneração óssea e na regeneração da cartilagem da articulação emporomandibular. O objetivo do presente trabalho é descrever perspectivas da engenharia tecidual, envolvendo a participação de células-tronco e sua aplicabilidade no estágio atual da Odontologia.

Stem cells, also known as font cells may be defined as low differentiation grade cells that have the ability of self-reproduction, as well as generate differentiated cells of specialized tissue types. Cellular therapy has been suggested, through the transplant of progenitor cells in humans for the treatment of degenerative diseases, development alterations and tissue regeneration. In dentistry, it is expected new alternatives for the regeneration of the complex dentin-pulp, periodontal tissue, bone and temporomandibular joint regeneration. The aim of the present report is to describe future perspectives in tissue engineering using stem cells and its applicability in the current stage of dentistry.

Proteínas ósseas envolvidas na calcificação vascular de ratos urêmicos, paratireoidectomizados, alimentados com dieta rica e pobre em fósforo associada à infusão fixa de paratormônio / Correlation of chemokine ligands and its receptors with lymph node metastasis in head and neck squamous cell carcinoma

Bone tissue alterations and vascular calcification (VC) are commonly found in patients with chronic renal failure (CKD). The importance of phosphorus (P) and parathyroid hormone (PTH) is not clear, yet. An in vitro study showed that inorganic phosphate was able to transform vascular smooth muscle cells (VSMC) into calcifying cells confirmed for up-expression of Runx2 in these cells. Besides, it has been demonstrated the in vivo expression of Runx2 in intimal and medial VSMC in calcified arteries of CKD patients. We evaluated the effect of phosphorus (P) and parathyroid hormone (PTH) on bone remodeling and on the expression of bone proteins (Runx2, Osteoprotegerin, type I Collagen, Osteocalcin, Osteopontin and NF?B) in aortic valve and heart in experimental uremia. Wistar rats were submitted to parathyroidectomy, nephrectomy (Nx) and continuous infusion of 1-34 rat PTH in physiologic or 5 times the normal values. The diet was identical, however the P content was low (LP: 0,2%) or high (HP: 1,2%). We performed biochemical, histomorphometric, imuno-histochemistry and RT-PCR analysis. Rats submitted to Nx developed renal failure. The P overload contributed to loss bone volume independent of uremia. Besides Nx animals that received high PTH doses bone loss was slight probably because of the anabolic effect of PTH, which was attenuated by the phosphorus overload toxic. VC was only observed in Nx animals that received high PTH doses independently of P overload. However, the P overload with physiologic PTH doses induced phenotypic changes in VSMC that was confirmed for the up-expression of Runx2 on aorta of these animals. The high concentrations of P and PTH promoted histological changes on expression of osteoprotegerin and type I Collagen in calcified arteries and heart. This study does not established ideal levels of PTH sufficient for the maintenance of the bone integrity and also to prevent VC when animal are submitted to different P overload.